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多西环素对TGF-β1诱导肺成纤维细胞α-SMA、FN、Col Ⅰ表达的影响

杨明峰 张斌 杨艳英 王艺文 顾娟芳 王宏智

杨明峰, 张斌, 杨艳英, 王艺文, 顾娟芳, 王宏智. 多西环素对TGF-β1诱导肺成纤维细胞α-SMA、FN、Col Ⅰ表达的影响[J]. 中华全科医学, 2022, 20(1): 50-53. doi: 10.16766/j.cnki.issn.1674-4152.002274
引用本文: 杨明峰, 张斌, 杨艳英, 王艺文, 顾娟芳, 王宏智. 多西环素对TGF-β1诱导肺成纤维细胞α-SMA、FN、Col Ⅰ表达的影响[J]. 中华全科医学, 2022, 20(1): 50-53. doi: 10.16766/j.cnki.issn.1674-4152.002274
YANG Ming-feng, ZHANG Bin, YANG Yan-ying, WANG Yi-wen, GU Juan-fang, WANG Hong-zhi. Effect of doxycycline on the expression of alpha-SMA, fibronectin and collagen I in MRC-5 cell line induced by TGF-beta1[J]. Chinese Journal of General Practice, 2022, 20(1): 50-53. doi: 10.16766/j.cnki.issn.1674-4152.002274
Citation: YANG Ming-feng, ZHANG Bin, YANG Yan-ying, WANG Yi-wen, GU Juan-fang, WANG Hong-zhi. Effect of doxycycline on the expression of alpha-SMA, fibronectin and collagen I in MRC-5 cell line induced by TGF-beta1[J]. Chinese Journal of General Practice, 2022, 20(1): 50-53. doi: 10.16766/j.cnki.issn.1674-4152.002274

多西环素对TGF-β1诱导肺成纤维细胞α-SMA、FN、Col Ⅰ表达的影响

doi: 10.16766/j.cnki.issn.1674-4152.002274
基金项目: 

浙江省自然科学基金青年基金项目 LQ19H010001

嘉兴市医学重点支撑学科-风湿病学与自体免疫病学 2019-ZC-03

详细信息
    通讯作者:

    王宏智,E-mail:1975129622@qq.com

  • 中图分类号: R563 R978.1

Effect of doxycycline on the expression of alpha-SMA, fibronectin and collagen I in MRC-5 cell line induced by TGF-beta1

  • 摘要:   目的  研究多西环素(Doxy)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)向肌成纤维细胞转化的影响,探索Doxy抗肺纤维化的作用。  方法  体外培养MRC-5,采用不同浓度的Doxy(0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μg/mL)干预,72 h后采用MTT法检测细胞活性以确定Doxy浓度并进行分组。将该实验分为对照组(MRC-5)、阳性对照组(TGF-β1 10 ng/mL)、Doxy 2.5 μg/mL组、Doxy 5.0 μg/mL组、Doxy 10.0 μg/mL组、Doxy 20.0 μg/mL组,干预72 h后采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)、细胞免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)蛋白的表达,采用实时荧光定量法(qRT-PCR)检测α-SMA、FN、Col Ⅰ mRNA相对量的表达。采用单因素方差分析进行统计分析。  结果  Doxy浓度为40.0 μg/mL及80.0 μg/mL时MRC-5细胞的活性开始出现下降,分别为0.93±0.03、0.83±0.08,且在80.0 μg/mL处理时MRC-5细胞的活性与对照组相比出现明显的抑制(P<0.05)。qRT-PCR显示阳性对照组α-SMA、FN、Col Ⅰ mRNA的相对表达均明显高于对照组(1.62±0.04 vs. 0.94±0.05,4.33±0.28 vs. 0.98±0.06,2.25±0.97 vs. 1.04±0.04,均P<0.05),而Doxy 10.0 μg/mL组、Doxy 20.0 μg/mL组α-SMA、FN、Col Ⅰ mRNA的表达较阳性对照组均明显下降(0.70±0.15、0.41±0.11 vs. 1.62±0.04;1.19±0.85、0.79±0.06 vs. 4.33±0.28;0.94±0.12、0.52±0.07 vs. 2.25±0.97,均P<0.05)。Western blotting及免疫荧光也发现了同样的变化趋势。  结论  Doxy可通过抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞分化发挥抗纤维化作用。

     

  • 图  1  不同浓度的多西环素对MRC-5细胞活性的影响(n=6)

    注:与对照组比较,aP<0.05。

    图  2  多西环素对TGF-β1诱导的MRC-5细胞α-SMA、FN、Col Ⅰ mRNA的影响(n=6)

    注:与对照组比较,aP<0.05;与阳性对照组(TGF+Dox 0 μg/mL)比较,bP<0.05。

    图  3  多西环素对TGF-β1诱导的MRC-5细胞α-SMA、FN、Col Ⅰ蛋白表达的影响(Western blotting结果,n=6)

    注:与对照组比较,aP<0.05;与阳性对照组(TGF+Dox 0 μg/mL)比较,bP<0.05。

    图  4  多西环素对TGF-β1诱导的MRC-5细胞α-SMA、FN荧光表达的影响(免疫荧光结果)

    注:目的蛋白为绿色,细胞核为蓝色。

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出版历程
  • 收稿日期:  2020-05-29
  • 网络出版日期:  2022-03-03

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