Correlation between serum vitamins and vascular endothelial growth factor in late pregnancy and pre-eclampsia and fetal growth restriction
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摘要:
目的 探讨妊娠晚期血清维生素D及血管内皮生长因子(VEGF)与子痫前期及胎儿生长受限(FGR)的相关性，以期为诊治子痫前期和FGR提供依据。 方法 选择舟山市妇幼保健院2020年7月—2022年12月收治的妊娠晚期子痫前期孕妇124例为研究组，其中伴FGR 38例；另选择同期妊娠晚期正常孕妇54例为对照组。采用电化学免疫分析法测定2组孕妇血清25-羟维生素-D(25-OH-D)水平，酶联免疫吸附法测定血清VEGF水平。 结果 研究组血清25-OH-D[(73.42±6.71)nmol/L]和VEGF[(412.31±35.24)pg/mL]均低于对照组[(94.78±5.25)nmol/L、(536.21±26.23)pg/mL，P＜0.05]。FGR组血清25-OH-D[(69.20±5.96)nmol/L]和VEGF[(394.70±32.17)pg/mL]均低于无FGR组[(82.97±7.28)nmol/L、(452.17±27.49)pg/mL，P＜0.05]。25-OH-D和VEGF与子痫前期和FGR均呈负相关关系(P＜0.05)。25-OH-D预测子痫前期和FGR的灵敏度为83.30%和76.29%，特异度为77.43%和64.19%；VEGF预测子痫前期和FGR的灵敏度为80.13%和68.08%，特异度为68.92%和56.24%。25-OH-D和VEGF为子痫前期和FGR的独立影响因素。 结论 妊娠晚期子痫前期及FGR患者血清25-OH-D和VEGF水平下降，且与子痫前期及FGR的发生呈负相关关系。 Abstract:Objective To investigate the association between serum vitamin D and vascular endothelial growth factor (VEGF) levels in late pregnancy and pre-eclampsia and fetal growth restriction (FGR), to provide a basis for clinical diagnosis and management of pre-eclampsia and FGR. Methods The 124 patients with pre-eclampsia in the third trimester of pregnancy from July 2020 to December 2022 at Zhoushan Maternal and Child Health Hospital were selected as the study group, including 38 patients with FGR. In addition, 54 normal pregnant women in their third trimester of pregnancy from the same term as the control group. Serum 25-hydroxyvitamin D (25-OH-D) levels were measured by electrochemical immunoassay, and the serum VEGF levels were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Results Serum 25-OH-D [(73.42±6.71) nmol/L] and VEGF [(412.31±35.24) pg/mL] in the study group were lower than in the control group [(94.78±5.25) nmol/L, (536.21±26.23) pg/mL, P < 0.05]. Serum 25-OH-D [(69.20±5.96) nmol/L] and VEGF [(394.70±32.17) pg/mL] were lower in the FGR group than in the non-FGR group [(82.97±7.28) nmol/L, (452.17±27.49) pg/mL, P < 0.05]. Pearson analysis showed that 25-OH-D and VEGF were negatively correlated with pre-eclampsia and FGR (P < 0.05). In predicting pre-eclampsia and FGR, the sensitivity of 25-OH-D were 83.30% and 76.29%, and the specificity were 77.43% and 64.19%; VEGF had a sensitivity of 80.13% and 68.08%, and a specificity of 68.92% and 56.24%. 25-OH-D and VEGF were independent risk factors for pre-eclampsia and FGR. Conclusion The decrease in serum 25-OH-D and VEGF levels in patients with pre-eclampsia and FGR in the third trimester of pregnancy is negatively correlated with the occurrence of pre-eclampsia and FGR and is a risk factor for pre-eclampsia and FGR. -
妊娠期高血压是妊娠期特有的一种疾病，据统计我国妊娠期高血压发病率约为10%，严重影响人们的身心健康[1]。子痫前期是妊娠期高血压疾病的一种，是非常棘手的产科疾患，其具体病理机制尚未完全阐明[2-3]。胎儿生长受限(fetal growth restriction，FGR)主要为生长潜力低下的小于孕龄儿，相比于同孕龄出生的正常体重儿，FGR更容易出现胎死宫内、胎儿窘迫，且新生儿并发症发生率和死亡率也明显增高[4]。因此，预测妊娠晚期子痫前期及FGR的发生具有重要意义。25-羟维生素-D(25-hydroxyvitamin D，25-OH-D)不仅能够反映人体维生素D的营养状况，并可维持钙磷代谢。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)对滋养细胞侵入具有重要影响，并且是其侵入过程中的一种重要介导因素。近年来研究发现，25-OH-D及VEGF与妊娠期相关疾病具有明显相关性[5-6]。鉴于此，本研究旨在探讨妊娠晚期血清25-OH-D及VEGF水平与子痫前期及FGR的相关性，现报道如下。
1. 资料与方法
1.1 临床资料
选择舟山市妇幼保健院2020年7月—2022年12月收治的妊娠晚期子痫前期患者124例作为研究组。诊断标准：(1)子痫前期的诊断依据《妊娠期高血压疾病诊治指南(2015)》[7]中关于子痫前期的诊断标准；(2)FGR的诊断依据《妇产科学》[8]中关于FGR的诊断标准。纳入标准：(1)妊娠晚期子痫前期患者；(2)均为单胎头位妊娠；(3)具有完整的临床资料。排除标准：(1)合并糖尿病及原发性高血压者；(2)合并自身免疫性疾病、甲状腺疾病者；(3)具有家族高血压遗传史；(4)精神疾病者。124例患者年龄为21~37(27.86±3.29)岁；孕周为29~40(35.27±2.48)周；初产妇93例，经产妇31例。根据是否伴FGR分为FGR组(38例)和无FGR组(86例)。另选择舟山市妇幼保健院2020年7月—2022年12月妊娠晚期正常孕妇54例作为对照组，年龄为21~38(28.43±3.41)岁；孕周为28~39(35.01±2.53)周；初产妇38例，经产妇16例。2组一般资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。本研究经舟山市妇幼保健院伦理委员会批准(2020伦理第001号)，孕妇及家属均签署知情同意书。
1.2 检测方法
采集所有受试者空腹外周静脉血5 mL，离心6 min(转速3 000 r/min，离心半径为10 cm)。收集血清，置于-70 ℃下保存待测。采用电化学免疫分析法测定血清25-OH-D水平，采用酶联免疫吸附法测定血清VEGF水平，严格依据试剂盒说明书标准测定。人25-OH-D试剂盒和人VEGF试剂盒均购自北京九强生物技术股份有限公司。
1.3 观察指标
(1) 比较研究组与对照组血清25-OH-D和VEGF水平；(2)比较FGR组与无FGR组血清25-OH-D和VEGF水平；(3)分析25-OH-D和VEGF与子痫前期和FGR的相关性；(4)分析25-OH-D和VEGF对子痫前期和FGR的预测价值；(5)分析25-OH-D和VEGF是否为子痫前期和FGR发生的独立影响因素。
1.4 统计学方法
采用SPSS 25.0统计学软件处理数据。计量资料用 x±s表示，2组间比较采用成组t检验；计数资料采用例数表示，组间比较采用χ2检验；采用Pearson相关分析研究25-OH-D和VEGF与子痫前期和FGR的相关性；采用ROC曲线分析25-OH-D和VEGF对子痫前期和FGR的预测价值；采用多因素logistic回归分析研究25-OH-D和VEGF是否为子痫前期和FGR发生的独立影响因素。P＜0.05差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 研究组与对照组血清25-OH-D和VEGF水平比较
研究组血清25-OH-D和VEGF水平均低于对照组(P＜0.05)，见表 1。
表 1 研究组与对照组孕妇血清25-OH-D和VEGF水平比较(x±s)Table 1. Comparison of serum 25-OH-D and VEGF levels between the study group and the control group(x±s)组别 例数 25-OH-D(nmol/L) VEGF(pg/mL) 研究组 124 73.42±6.71 412.31±35.24 对照组 54 94.78±5.25 536.21±26.23 t值 20.775 23.177 P值 ＜0.001 ＜0.001 2.2 子痫前期FGR组与无FGR组血清25-OH-D和VEGF水平比较
FGR组血清25-OH-D和VEGF水平均低于无FGR组(P＜0.05)，见表 2。
表 2 FGR组与无FGR组子痫前期孕妇血清25-OH-D和VEGF水平比较(x±s)Table 2. Comparison of serum 25-OH-D and VEGF levels between the pre eclampsia FGR group and the non FGR group(x±s)组别 例数 25-OH-D(nmol/L) VEGF(pg/mL) FGR组 38 69.20±5.96 394.70±32.17 无FGR组 86 82.97±7.28 452.17±27.49 t值 11.236 10.177 P值 ＜0.001 ＜0.001 2.3 25-OH-D和VEGF与子痫前期和FGR的相关性
Pearson相关性分析结果显示，25-OH-D和VEGF与子痫前期和FGR均呈负相关关系(P＜0.05)，见表 3。
表 3 25-OH-D和VEGF与子痫前期和FGR的相关性分析Table 3. Correlation analysis of 25-OH-D and VEGF with preeclampsia and FGR项目 子痫前期 FGR r值 P值 r值 P值 25-OH-D -0.762 < 0.001 -0.624 < 0.001 VEGF -0.698 < 0.001 -0.516 < 0.001 2.4 25-OH-D和VEGF对子痫前期的预测价值
ROC曲线分析显示，25-OH-D预测子痫前期的灵敏度为83.30%，特异度为77.43%；VEGF预测子痫前期的灵敏度为80.13%，特异度为68.92%；25-OH-D联合VEGF预测子痫前期的灵敏度为94.53%，特异度为89.91%。25-OH-D联合VEGF预测子痫前期的灵敏度和特异度高于25-OH-D和VEGF(P＜0.05)，见表 4、图 1。
表 4 25-OH-D和VEGF对子痫前期的预测价值分析Table 4. ROC curve analysis of the predictive value of 25-OH-D and VEGF for preeclampsia项目 AUC 95% CI 截断值 P值 灵敏度(%) 特异度(%) 25-OH-D 0.880 0.830~0.931 80.60 nmol/L ＜0.001 83.30 77.43 VEGF 0.842 0.779~0.906 475.22 pg/mL ＜0.001 80.13 68.92 25-OH-D联合VEGF 0.939 0.903~0.974 ＜0.001 94.53ab 89.91ab 注：与25-OH-D比较，χ2值分别为3.982、4.864，aP＜0.05；与VEGF比较，χ2值分别为4.659、7.965，bP＜0.05。 
图 1 ROC曲线分析25-OH-D和VEGF对子痫前期的预测价值Figure 1. ROC curve analysis of the predictive value of 25-OH-D and VEGF for preeclampsia2.5 25-OH-D和VEGF对FGR的预测价值
ROC曲线分析显示，25-OH-D预测FGR的灵敏度为76.29%，特异度为64.19%；VEGF预测FGR的灵敏度为68.08%，特异度为56.24%。25-OH-D联合VEGF灵敏度为84.90%，特异度为86.80%。25-OH-D联合VEGF预测子痫前期灵敏度和特异度高于25-OH-D和VEGF(P＜0.05), 见表 5、图 2。
表 5 25-OH-D和VEGF对FGR的预测价值分析Table 5. ROC curve analysis of the predictive value of 25-OH-D and VEGF for FGR项目 AUC 95% CI 截断值 P值 灵敏度(%) 特异度(%) 25-OH-D 0.754 0.654~0.853 73.85 nmol/L ＜0.001 76.29 64.19 VEGF 0.665 0.562~0.768 416.50 pg/mL 0.004 68.08 56.24 25-OH-D联合VEGF 0.859 0.782~0.935 ＜0.001 84.90ab 86.80ab 注：与25-OH-D比较，χ2值分别为4.413、7.476，aP＜0.05；与VEGF比较，χ2值分别为5.871、9.628，bP＜0.05。 
图 2 25-OH-D和VEGF对FGR预测价值的ROC曲线Figure 2. ROC curve analysis of the predictive value of 25-OH-D and VEGF for FGR2.6 25-OH-D和VEGF与子痫前期关系的logistic回归分析
以子痫前期发生情况为因变量(发生=0，未发生=1)，25-OH-D(降低=0，正常=1)和VEGF(降低=0，正常=1)为自变量，行多因素logistic回归分析，结果显示，25-OH-D和VEGF为子痫前期发生的独立影响因素，见表 6。
表 6 25-OH-D和VEGF与子痫前期关系的多因素logistic回归分析Table 6. Multivariate logistic regression analysis of the relationship between 25-OH-D, VEGF and preeclampsia变量 B SE Waldχ2 P值 OR值 95% CI 25-OH-D 1.498 0.517 8.395 0.004 4.473 1.624~12.321 VEGF 1.561 0.627 6.198 0.013 4.764 1.394~16.280 2.7 25-OH-D和VEGF与FGR关系的logistic回归分析
以FGR发生情况为因变量(发生=0，未发生=1)，25-OH-D(降低=0，正常=1)和VEGF(降低=0，正常=1)为自变量，行多因素logistic回归分析，结果显示，25-OH-D和VEGF为FGR发生的独立影响因素，见表 7。
表 7 25-OH-D和VEGF与FGR关系的多因素logistic回归分析Table 7. Multivariate logistic regression analysis of the relationship between 25-OH-D, VEGF and FGRs变量 B SE Waldχ2 P值 OR值 95% CI 25-OH-D 1.637 0.625 6.860 0.009 5.140 1.510~17.496 VEGF 1.546 0.621 6.198 0.013 4.693 1.389~15.850 3. 讨论
子痫前期作为妊娠期一种特发性疾病，其特征主要为高血压、蛋白尿，有研究[9-10]认为其发病始发因素可能是子宫螺旋动脉浸润浅，胎盘形成不良，从而造成胎盘血供受不同程度干扰，并且与胎盘缺氧缺血密切相关。子痫前期孕妇在母体与胎盘间会出现排斥反应，可造成子宫胎盘螺旋动脉重塑障碍，从而导致胎盘低灌注、缺血缺氧，母体免疫系统在正常情况下是平衡的[11-12]。子痫前期的基本病因主要有血管内皮细胞受损、子宫-胎盘血管结构异常、遗传因素及炎症免疫过度激活[13]。同时，子痫前期可引起多种不良妊娠结局，如FGR、胎儿宫内窘迫及早产等，其中最多见的是FGR。FGR的发生可造成新生儿认知障碍、脑瘫、高胆红素血症及窒息等并发症，对新生儿的生长发育安全造成严重的危害[14]。
内皮细胞损伤是子痫前期发病中的重要因素，VEGF具有促血管生长的作用，可与血管内皮细胞表面受体结合，从而增加血管内皮细胞通透性及促使新生血管形成[15]。VEGF在正常妊娠过程中可对内皮细胞浸润、增生、分化、迁移有一定的促进作用，从而影响患者血管系统的生长和修复效果[16]。持续低水平的VEGF可有效延长内皮细胞功能，但子痫前期会导致患者VEGF水平下降，无法达到维持血管生成的阈值，从而致使内皮细胞损伤，最终会出现妊娠期高血压[17]。同时，妊娠晚期VEGF水平降低可使胎盘从母体中获得的血液供应减少，甚至中断，从而导致胎盘缺氧缺血，造成FGR的发生[18]。本研究显示，研究组血清VEGF水平低于对照组，由此可见妊娠晚期子痫前期患者血清VEGF水平明显降低；FGR组血清VEGF水平低于无FGR组，可见妊娠晚期子痫前期伴FGR患者血清VEGF水平明显降低；此外，VEGF与子痫前期和FGR呈负相关关系，且对预测子痫前期和FGR的灵敏度和特异度良好，是子痫前期和FGR发生的独立影响因素。
维生素D在维持血压的调节、免疫的调节过程中具有重要的调控作用，维生素D缺乏可能与孕妇发生子痫前期有关[19]。维生素D具有重要的调节钙磷代谢平衡的作用。血清钙离子能够通过影响血管内皮细胞的功能，减轻血管内皮细胞的炎症性损伤，从而降低血压波动；血清磷在细胞膜功能及信号传递维持中具有重要作用。25-OH-D不仅能够反映人体维生素D的营养状况，而且能促进人体对钙的吸收和利用。有研究[20]显示，25-OH-D在子痫前期是显著下降的，其在血液中的浓度最高且最稳定，且半衰期长，具有诱导血管形成的作用。本研究显示，研究组血清25-OH-D水平低于对照组，由此可见妊娠晚期子痫前期患者血清25-OH-D水平明显降低；FGR组血清25-OH-D水平低于无FGR组，由此可见妊娠晚期子痫前期伴FGR患者血清25-OH-D水平明显降低；此外，25-OH-D与子痫前期和FGR呈负相关关系，且对预测子痫前期和FGR的灵敏度和特异度良好，是子痫前期和FGR发生的独立影响因素。
综上所述，血清25-OH-D和VEGF水平在妊娠晚期子痫前期及FGR患者中低表达，与子痫前期及FGR发生具有相关性，为影响子痫前期及FGR的危险因素，且25-OH-D和VEGF联合检测在子痫前期及FGR发生中具有良好的预测价值。
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图 1 ROC曲线分析25-OH-D和VEGF对子痫前期的预测价值
Figure 1. ROC curve analysis of the predictive value of 25-OH-D and VEGF for preeclampsia
图 2 25-OH-D和VEGF对FGR预测价值的ROC曲线
Figure 2. ROC curve analysis of the predictive value of 25-OH-D and VEGF for FGR
表 1 研究组与对照组孕妇血清25-OH-D和VEGF水平比较(x±s)
Table 1. Comparison of serum 25-OH-D and VEGF levels between the study group and the control group(x±s)
组别 例数 25-OH-D(nmol/L) VEGF(pg/mL) 研究组 124 73.42±6.71 412.31±35.24 对照组 54 94.78±5.25 536.21±26.23 t值 20.775 23.177 P值 ＜0.001 ＜0.001 
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表 2 FGR组与无FGR组子痫前期孕妇血清25-OH-D和VEGF水平比较(x±s)
Table 2. Comparison of serum 25-OH-D and VEGF levels between the pre eclampsia FGR group and the non FGR group(x±s)
组别 例数 25-OH-D(nmol/L) VEGF(pg/mL) FGR组 38 69.20±5.96 394.70±32.17 无FGR组 86 82.97±7.28 452.17±27.49 t值 11.236 10.177 P值 ＜0.001 ＜0.001
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表 3 25-OH-D和VEGF与子痫前期和FGR的相关性分析
Table 3. Correlation analysis of 25-OH-D and VEGF with preeclampsia and FGR
项目 子痫前期 FGR r值 P值 r值 P值 25-OH-D -0.762 < 0.001 -0.624 < 0.001 VEGF -0.698 < 0.001 -0.516 < 0.001
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表 4 25-OH-D和VEGF对子痫前期的预测价值分析
Table 4. ROC curve analysis of the predictive value of 25-OH-D and VEGF for preeclampsia
项目 AUC 95% CI 截断值 P值 灵敏度(%) 特异度(%) 25-OH-D 0.880 0.830~0.931 80.60 nmol/L ＜0.001 83.30 77.43 VEGF 0.842 0.779~0.906 475.22 pg/mL ＜0.001 80.13 68.92 25-OH-D联合VEGF 0.939 0.903~0.974 ＜0.001 94.53ab 89.91ab 注：与25-OH-D比较，χ2值分别为3.982、4.864，aP＜0.05；与VEGF比较，χ2值分别为4.659、7.965，bP＜0.05。
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表 5 25-OH-D和VEGF对FGR的预测价值分析
Table 5. ROC curve analysis of the predictive value of 25-OH-D and VEGF for FGR
项目 AUC 95% CI 截断值 P值 灵敏度(%) 特异度(%) 25-OH-D 0.754 0.654~0.853 73.85 nmol/L ＜0.001 76.29 64.19 VEGF 0.665 0.562~0.768 416.50 pg/mL 0.004 68.08 56.24 25-OH-D联合VEGF 0.859 0.782~0.935 ＜0.001 84.90ab 86.80ab 注：与25-OH-D比较，χ2值分别为4.413、7.476，aP＜0.05；与VEGF比较，χ2值分别为5.871、9.628，bP＜0.05。
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表 6 25-OH-D和VEGF与子痫前期关系的多因素logistic回归分析
Table 6. Multivariate logistic regression analysis of the relationship between 25-OH-D, VEGF and preeclampsia
变量 B SE Waldχ2 P值 OR值 95% CI 25-OH-D 1.498 0.517 8.395 0.004 4.473 1.624~12.321 VEGF 1.561 0.627 6.198 0.013 4.764 1.394~16.280
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表 7 25-OH-D和VEGF与FGR关系的多因素logistic回归分析
Table 7. Multivariate logistic regression analysis of the relationship between 25-OH-D, VEGF and FGRs
变量 B SE Waldχ2 P值 OR值 95% CI 25-OH-D 1.637 0.625 6.860 0.009 5.140 1.510~17.496 VEGF 1.546 0.621 6.198 0.013 4.693 1.389~15.850
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